1. 介质：如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。
葡聚糖凝胶（sephadex）：较强吸水性，与交联度成反比。
应用范围：分级分离各种抗原与抗体；去掉复合物中的小分子物质，如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片；分析血清中的免疫复合物；分子量的测定。 商品：SephadexG，G值与交联度成反比。 颗粒越细，流速越慢，分离效果越好。 丙烯葡聚糖凝胶（sephacryl）：反压低，机械性能好，分离速度快，分辨率高，理化稳定，在SDS、6M盐酸胍、8M尿素中均可使用。
应用范围：精细分离与纯化；去掉溶液中的小分子物质，如除盐、细胞色素及水解的蛋白质碎片；去除蛋白溶液中的热源类物质；分离蛋白、多糖与核酸；分子量的测定。 型号：S-100HR、S-200HR、S-300HR、S-400HR、S- 500HR、S-1000SF。 分离范围：M1×103~M1×108。 聚丙烯酰胺凝胶（生物胶Bio-Ge1P）：完全惰性，适合蛋白、核苷（酸）；酰胺键遇强酸水解。 使用范围：pH2~11。 琼脂糖凝胶（sepharose）：孔径大、机械强度好、流速快，只适大分子如病毒颗粒的分离，强酸强碱能引起结构破坏，不耐高温，**好使用条件控制在pH 4～9之间，温度0～40℃。 Superdex（Pharmarcia公司，目前**佳凝胶过滤介质）：流速快、反压低、非特异性吸附低、样品回收率高、理化稳定（0.1mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH中40℃保温400小时分辨力保持不变，1% SDS、8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍能保持良好的色谱性能）。 适应范园：大分子精细纯化。
2. 基本操作流程：
凝胶选择：
eg.除盐，粗中粒G-25/G-50 凝胶预处理：
eg.G系，溶胀，过量缓冲液，冰箱/室温/沸水；S系，除去保存液中乙醇。除气泡，加热/抽真空。
将干胶往水里加，边加边搅，以防凝胶结块，然后放到沸水浴中加热接近100℃，几个小时就可以使其溶胀，还可起到除去颗粒内部气泡和杀菌作用。但应注意尽量避免在酸或碱中加热（测pH），以免凝胶被破坏。
层析柱选择：
与样品量与分辨率相关，蛋白纯化，柱体积为样品体积的25~100倍，去盐等小分子，柱体积为样品体积的4~10倍；分辨率与长度成正比，长度一般<100cm，直径与长度范围(1:25~1:100)，蛋白纯化为1:20~1:100，去盐等小分子为1:5~1:25，求高分辨率，可串连使用。 层析柱安装：
检测各部件完好性→介质的水混合液搅拌均匀→装柱前层析柱底部灌水→装填（将层析柱与地面垂直
固定在架子上，下端流出口用夹子夹紧，柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器，关闭层析柱出水口，向柱管内加入约1/4柱容积的洗脱液，将凝胶调成较稀薄的浆头液盛于柱顶的容器中，然后在微微地搅拌下使凝胶下沉于柱内，使其自然沉降，等凝胶沉降约2-3cm后，打开柱的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉积，这样凝胶粒水平上升，待沉积的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭出水口，通过2-3倍柱床体积的洗脱液使柱床稳定(流速0.5～1 mL/min)，始终保护凝胶上端有一段液体，拆除柱顶装置，用相应的滤纸片轻轻盖在凝胶床表面）
